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實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞貼壁問(wèn)題探究
點(diǎn)擊次數(shù):571 更新時(shí)間:2024-01-29

        細(xì)胞貼壁細(xì)胞(除腫瘤細(xì)胞外)在體外培養(yǎng)條件下,完成貼壁后均為單層生長(zhǎng),原因是貼壁細(xì)胞有接觸性抑制的特點(diǎn)。一般認(rèn)為接觸抑制是細(xì)胞間的一種識(shí)別作用,對(duì)于動(dòng)物細(xì)胞的形態(tài)形成與穩(wěn)定具有重要性的作用。由于貼壁細(xì)胞的一面是緊貼在培養(yǎng)瓶上的,如果其上方存在細(xì)胞與其相粘附,那么下方的細(xì)胞很快就會(huì)缺乏營(yíng)養(yǎng)餓死。

不貼壁的一些原因:

1. 胰酶消化時(shí)間把控不當(dāng):消化不夠細(xì)胞本身就是成團(tuán)的;若胰酶處理太久,容易造成細(xì)胞膜蛋白損傷,使細(xì)胞貼壁不緊,顯微鏡下觀察立體感不強(qiáng),嚴(yán)重的時(shí)候甚至?xí)斐杉?xì)胞死亡。

2. 缺少貼壁因子:血清中含有促貼壁因子,而無(wú)血清培養(yǎng)基工藝中由于缺少這種促貼壁因子,細(xì)胞的貼壁效果會(huì)下降很多。

3. 支原體或細(xì)菌的污染。

4. 培養(yǎng)液配制、儲(chǔ)存不當(dāng),如pH值過(guò)堿,Gln量太少等原因。

5. 復(fù)蘇的細(xì)胞本身狀態(tài)不好,已經(jīng)老化,失去貼附性。

6. 接種細(xì)胞數(shù)目太少,無(wú)法分泌足夠的細(xì)胞外基質(zhì)。

7. 復(fù)蘇時(shí)處理速度太慢,復(fù)蘇過(guò)程不當(dāng)。

如何促進(jìn)細(xì)胞貼壁:

1. 適度消化細(xì)胞:HepG-2、A549、Hela、SGC-7901幾種癌細(xì)胞處理時(shí)間可適當(dāng)放長(zhǎng),一般處理5-6min,C2C12、COS-7、NIH-3T3比較容易脫落,2min足矣,P19Cl6和293細(xì)胞貼壁不緊,可在PBS漂洗后,直接換新鮮培養(yǎng)基打散。

2. 最好用塑料瓶培養(yǎng),如果是玻璃瓶,那么可以用鼠尾膠原包被一下培養(yǎng)瓶,或者用鹽酸對(duì)培養(yǎng)瓶進(jìn)行蝕刻,或者涂Laminin/fibronectin/collagen/BSA,也可以幫助細(xì)胞貼附新的培養(yǎng)瓶,細(xì)胞不易貼壁,建議加多聚賴氨酸處理。

3. 正確配制消化液或培養(yǎng)液。

4. 使用合適的細(xì)胞外基質(zhì)或貼壁試劑。

5. 復(fù)蘇新的細(xì)胞,第一周用20%血清幫助細(xì)胞復(fù)原。

6. 傳代接種一定要鋪的均勻,避免細(xì)胞抱團(tuán)生長(zhǎng)。

7. 細(xì)胞傳代24小時(shí)之內(nèi),最好不要晃動(dòng),以免影響貼壁。

8. 體內(nèi)上皮細(xì)胞生長(zhǎng)在膠原構(gòu)成的基膜上,因此培養(yǎng)在有膠原的底物上有利于生長(zhǎng)。人或小鼠表皮細(xì)胞培養(yǎng),可以用γ射線照射后的3T3細(xì)胞為飼養(yǎng)層,另外降低pH、Ca2+含量和溫度,均有利于上皮細(xì)胞生長(zhǎng)。


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